A3 人淋巴細胞白血病細胞/STR鑒定介紹

A3亞克隆來自Jurkat細胞系。用Fas抗體處理Jurkat細胞，用有限稀釋法獲得一個細胞系，此細胞系對Fas介導的凋亡產(chǎn)生自發(fā)抗性的比例較低。得到的亞克隆對Fas-介導的凋亡十分敏感。挑選對新霉素具有抗性的野生型A3細胞，并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體。

細胞特性

1） 來源：T細胞白血病，T淋巴細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

A3 人淋巴細胞白血病細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。        

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養(yǎng)。

每2至3天添加一次新鮮培養(yǎng)基（取決于細胞密度），換液可以通過添加新鮮培養(yǎng)基或更換培養(yǎng)基來維持。或者，可以通過離心來維持，隨后以3至5×105個活細胞/ mL重新懸浮于新鮮培養(yǎng)基中。保持細胞濃度在2×105和2×106活細胞/ mL之間。

1，收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議客戶凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面以T25瓶為類，

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細胞服務(wù)
       各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
       原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等；
       原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù)；

二、細胞株/系服務(wù)
       細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書；
       細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導；
       細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等；

三、iPS細胞
       iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
       iPS細胞增殖及冷凍保存；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習；
       新藥及實驗儀器上市前評估；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等

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